针灸免疫研究概况

针灸对正常人体和动物,对机体的免疫系统有双向调整作用,既能够调动免疫成分的不足,又可以抑制过度的免疫反应。针灸疗法可以提高机体特异性及非特异性免疫能力,对于吞噬细胞和T淋巴细胞的各种免疫指标,几乎都可以明显提高。对血清免疫球蛋白、白介素、补体、调理素、抗体（凝集素、溶血素、溶菌素、杀菌素等）、溶菌酶和血浆杀菌力等都有一定的调整作用。针灸可以调节肾上腺素α和β受体治疗过敏性疾病。针灸能治疗免疫失调导致的疾病是通过神经内分泌免疫网络综合调节体现的。     

PRRSV流行株Nsp2、ORF5和ORF3基因序列的分析

采用RT-PCR方法扩增2006年--2007年从江西、湖南、海南、广东等4省的不同猪场病猪体内分离的11株猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）流行株的Nsp2、ORF5和ORF3基因,并进行序列分析。结果表明,11个PRRSV流行株的Nsp2均发生30个氨基酸的不连续缺失,缺失位置与JXA1毒株相同;11个PRRSV流行株的ORF5、ORF3基因和JXA1相应序列的核苷酸同源性分别为99．2％～99．8％、99．1％～99．6％,氨基酸同源性分别为98．0％～99．5％、98．4％～99．6％;11个PRRSV流行株之间ORF5基因的核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为98．8％～100．0oA、98．0oA～100．0％,其中5个流行株的ORF3基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为99．0％～99．6％、98．8％～99．69,6。根据Nsp2所建立的遗传系统发育树可知这11个PRRSV流行株与JXA1株的亲缘关系很近。     

高效液相色谱法测定清宫液3号丹参酮ⅡA含量

清宫液3号是中国农业科学院中兽医研究所根据中兽医理论研制的一种复方液体油混悬制剂,系由丹参等中药经科学加工后制成,具有消炎、抗菌、止痛等功效。主要用于奶牛子宫内膜炎的治疗,经临床试用疗效显著。本药剂申报新兽药,其主要药材有效成分的含量测定是不可缺少的内容。笔者等用HPLC法对清官液3号组方的主要药材丹参中的丹参酮ⅡA含量进行测定,结果表明该方法专属性强,重现性好,可作为该制剂的测定方法。     

中药复方病毒力克抗炎作用及其作用机理的研究

研究兽用中药复方病毒力克的抗炎作用,并初步探讨其作用机理。采用小鼠耳肿胀模型、小鼠腹腔毛细血管通透性增高模型、小鼠足跖肿胀模型及小鼠纸片肉芽肿模型观察病毒力克的抗炎作用,同时测定小鼠角叉菜胶致足炎性渗出物中的MDA、HA、5-TH及血清中NO含量,研究病毒力克的抗炎机制。结果显示,病毒力克能显著抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀,明显抑制醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性,减轻角叉菜胶致小鼠足跖肿胀度,并有抑制小鼠纸片肉芽肿的作用;病毒力克能明显降低角叉菜胶致足炎性渗出物中的MDA、HA、5-TH及血清中NO的含量。研究结果表明,病毒力克具有明显的抗炎作用,其抗炎机理与其抑制炎性介质MDA、histamin、5-TH及血清中NO的释放有关。     

柴达木绒山羊八个微卫星位点遗传多样性分析

以柴达木绒山羊为研究对象,对其8个微卫星位点进行遗传多样性分析,计算各位点的等位基因频率(P)、杂合度(H)、多态信息含量(PIC)和有效等位基因数(N)。结果表明:8个微卫星位点在柴达木绒山羊均呈高度的多态性(PIC>0.5);位点LSCV 24基因杂合度、有效等位基因和多态信息含量都最高(H=0.796,N=6.916,PIC=0.766);位点BM 3413的基因杂合度、多态信息含量都最小(H=0.676,PIC=0.615);位点MAF-70的有效等位基因最小(N=0·7672)。因此,柴达木绒山羊群体中遗传背景复杂,遗传多样性较丰富;这8个微卫星位点也可用于柴达木绒山羊羊绒性状的进一步研究。     

三个牦牛品种生长激素受体(GHR)基因PCR-SSCP分析

为了加速牦牛群体的复壮,本实验利用PCR-SSCP技术对甘南、天祝、青海高原3个牦牛品种的生长激素受体基因进行了多态性分析。结果表明:第1、3对引物扩增无多态,第2对引物扩增3个牦牛品种均发现2个等位基因A和B,天祝白牦牛A的基因频率为0.3682,B的基因频率为0.6318;甘南牦牛A的基因频率为0.1596,B的基因频率为0.8404;高原牦牛A的基因频率为0.0700,B的基因频率为0.9300。青海高原牦牛群体处于哈代-温伯格平衡状态,而甘南和天祝牦牛处于不平衡状态,应加强对该基因位点的选择强度。     

归芎益母散对血瘀型胎衣不下临床疗效及与Th1/Th2细胞因子的相关性

筛选45头血瘀型胎衣不下奶牛,随机分为4组,分别为归芎益母散高、中、低剂量组(800,400,200 g/头)、药物对照组(250 g/头,益母生化散),经口灌服给药,用药1～3 d,另设1个空白对照组(健康奶牛10头)。结果表明,与空白对照组比较,用药前,血清中IL-2、TNF-ɑ显著降低(P0.01,P0.05),IL-4、IL-10显著升高(P0.01),Th1/Th2型细胞因子显著偏小(P0.01),用药后,高、中剂量组患牛日均产奶量,产褥期子宫炎发生率及产后180 d繁育性能指标与其相当(P0.05),血清IL-2、TNF-ɑ水平上升(P0.01,P0.05),IL-4、IL-10水平降低(P0.01),Th1/Th2细胞因子趋于平衡,其中,高剂量组Th1/Th2细胞因子与空白对照组差异不显著(P0.05);与药物对照组比较,高、中剂量组治愈率升高18.2%,19.7%,产褥期子宫炎发生率降低了9.1%,11.4%,归芎益母散中剂量组配种次数显著减少(P0.05),空怀时间明显缩短(P0.01),高剂量组空怀时间显著缩短(P0.05)。说明归芎益母散不仅具有调节患牛的子宫收缩和整体免疫机能的潜在药理效应,还促进滞留胎衣及早排出,降低受试奶牛继发感染产褥期子宫炎,有效提高了奶牛的繁殖性能,还具有促进患牛泌乳的作用。调节外周血中Th1/Th2细胞因子趋于平衡,是归芎益母散治疗奶牛胎衣不下重要机理之一。     

中国五个绵羊群体mtDNA D-环遗传多样性研究

为探讨中国绵羊mtDNA D-环遗传多样性,通过PCR扩增和测序技术,对中国五个绵羊群体mtDNA D-环全序列进行研究,发现这五个绵羊群体mtDNA D-环碱基组成:A、T、G、C平均含量分别为34.66%、28.94%、13.90%、22.50%,(A+T)%含量明显高于(G+C)%含量,碱基突变以转换/颠换为主,且在绵羊mtDNA D-环区存在75bp的重复序列,含有4个重复序列是中国绵羊的基本特征;遗传距离分析结果显示,甘肃滩羊与其他中国绵羊群体之间的遗传距离较大,为0.0459～0.0573,其他四个绵羊群体之间遗传距离相对较小,为0.0246～0.0342,核苷酸多样度Pi为0.0323%,说明这五个绵羊群体mtDNA D-环遗传多样性均较贫乏,应该对其遗传资源进行保护.     

CRISPR系统促进脂肪干细胞成骨分化与抑制成脂分化的研究

本研究旨在优化组织培养法分离小鼠脂肪间充质干细胞（adipose-derived stem cells,ASCs）,为研究成骨分化和成脂分化在间充质干细胞分化过程中的相互影响奠定基础。通过细胞形态学观察、细胞生长曲线和流式仪器检测所分离获得的间充质干细胞的特性,利用CRISPR-dCas9系统在快速促进间充质干细胞成骨分化的前提下观察其对成脂分化的影响,并通过生化染色、实时荧光定量PCR和免疫细胞学等手段进行分析。结果显示,接种3~5 d后可见细胞从组织块周围爬出,光镜下可见细胞形态多为成纤维细胞样的梭形细胞,且形态单一均匀,具有较高的爬出率,可以大大提高脂肪间充质干细胞的分离效率;通过CRISPR-dCas9系统激活Runx2和Osterix基因后可以促进间充质干细胞的成骨分化,实时荧光定量PCR及油红O染色结果显示,CRISPR-dCas9系统可以同时抑制间充质干细胞的成脂分化;通过CRISPR-dCas9-KRAB系统同时抑制成骨相关基因Runx2和Osterix后可以促进成脂分化。本研究利用组织贴壁法成功获得了高纯度的脂肪间充质干细胞,具有间充质干细胞的特性和分化能力;利用CRISPR系统可以同时过表达Runx2和Osterix两个基因,可以在进成骨分化的同时抑制成脂分化,表明成脂分化和成骨分化的相关性,为基因编辑在间充质干细胞诱导分化和临床应用方面提供了新的思路和方法。     

响应面法优化当归补血汤液体发酵工艺

为确定当归补血汤液体发酵的最佳工艺,本试验采用枯草芽孢杆菌为发酵菌种,以多糖提取率为评价指标进行液体发酵工艺优化。首先采用单因素试验考察发酵培养基中葡萄糖和蛋白胨添加量、菌液接种量和发酵时间对多糖提取率的影响,再以此为基础,采用Box-Behnken中心组合试验设计法,选取葡萄糖添加量、蛋白胨添加量、接种量、发酵时间为发酵优化的4个因素,以多糖提取率为响应值,设计4因素3水平的试验方案并进行响应面分析,以确定各因素与响应值多糖提取率的关系。结果显示,各因素对多糖提取率变化的贡献大小依次为葡萄糖添加量、蛋白胨添加量、接种量、发酵时间;利用响应面分析结果显示,蛋白胨添加量与接种量和发酵时间、接种量和发酵时间的交互作用较为显著,最终确定最佳发酵工艺条件为：葡萄糖添加量0.95%,蛋白胨添加量1.52%,接种量2.92%,发酵时间35.8 h。该条件下多糖提取率达到9.23%,与未发酵组（4.62%）相比,多糖含量提高近2倍。该工艺对液体发酵当归补血汤产多糖优化效果显著,为发酵当归补血汤的进一步开发利用提供了理论基础。